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      非洲豬瘟防控工作中消毒劑的選擇及使用

      時間:2020-12-10 來源:中國動物檢疫 本文字數:5824字
      作者:南文龍,鞏明霞,鄒艷麗 單位:中國動物衛生與流行病學中心 揚州大學

        摘    要: 為評價含碘、季銨鹽、過硫酸氫鉀、二氧化氯這四類常用消毒劑對非洲豬瘟病毒(ASFV)的滅活效果,參考OIE參考實驗室相關操作流程,基于畜禽欄舍、運載工具、器具消毒及皮膚黏膜消毒目的,根據說明書標明的濃度范圍選擇不同工作濃度,與ASFV分別在4℃和20℃條件下作用30分鐘,10倍連續稀釋后接種豬肺泡巨噬細胞,同時加入豬紅細胞,培養觀察紅細胞吸附現象。結果顯示,本試驗四類消毒劑對ASFV均有滅活作用,但滅活效果因消毒劑的種類和工作濃度不同有所差異。相同工作濃度的同一消毒劑產品,在4℃和20℃這兩種條件下的滅活效果基本一致。季銨鹽類和二氧化氯類消毒劑,在說明書推薦的工作濃度下,均有效滅活ASFV;多數含碘類、過硫酸氫鉀類消毒劑,需在其說明書標明濃度范圍的較高工作濃度時,才可有效殺滅ASFV。本研究為非洲豬瘟防控工作中消毒劑的選擇和使用提供參考。

        關鍵詞: 非洲豬瘟; 消毒劑; 滅活; 病毒; 消殺;

        Abstract: In order to evaluate the inactivation effect of four kinds of disinfectants against African swine fever virus(ASFV)including iodine disinfectant,quaternary ammonium,potassium persulfate and chlorine dioxide,with reference to relevant operation procedures of OIE reference laboratories,and based on the purpose of disinfecting livestock and poultry sheds,transportation vehicles,instruments and skin mucous membrane,the above disinfectants were set at different concentrations according to corresponding instructions and reacted with ASFV for 30 minutes at 4 ℃ and 20 ℃,respectively. The reaction products were diluted 10 times continuously and inoculated in porcine alveolar macrophages,meanwhile,porcine erythrocytes were added in to cultivate and observe the adsorption status of red blood cells. The results showed that ASFV could be inactivated by all the above disinfectants,but the effect depended on the type and concentration of the disinfectants;the same disinfectant with same concentration could receive similar effect at 4 ℃ and 20 ℃ ;ASFV could be effectively inactivated by quaternary ammonium and chlorine dioxide with the concentration as proposed in respective instructions;but failed by most iodine disinfectant and potassium persulfate unless the higher concentration was reached as indicated in corresponding instructions. The study provided some references to select and use disinfectants in the control of ASFV.

        Keyword: ASF; disinfectant; inactivation; virus; disinfection and sterilization;

        接觸傳播是非洲豬瘟(African swine fever,ASF)傳播的重要方式。據調查,在我國發生的多起規;B殖場ASF疫情是由人員、運輸工具攜帶非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)接觸豬群引發。同時,健康豬可通過接觸ASFV污染的水、飼料、墊料等而造成感染。因此,在生豬養殖、運輸調運、屠宰加工、檢驗檢疫等各環節,選擇合適消毒劑殺滅病毒,阻斷其接觸傳播途徑,對于ASF防控非常重要。
       

      非洲豬瘟防控工作中消毒劑的選擇及使用
       

        ASFV屬于囊膜DNA病毒,其衣殼由外脂膜下的數個同心的脂質和蛋白層組成,對乙醚和氯仿易感[1]。針對ASFV的消毒劑選擇,可借鑒已有針對囊膜病毒的消毒劑,如偽狂犬病病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬瘟病毒等[2]。甲醛、次氯酸鈉、檸檬酸、苛性鈉、酚化物、碘化物、季銨鹽等均已證實對ASFV有殺滅效果[3,4,5,6]。

        為評價我國市售消毒劑對ASFV的殺滅效果,本試驗選擇常用的市售含碘、季銨鹽、過硫酸氫鉀、二氧化氯等四類消毒劑,以OIE參考實驗室有關操作流程為依據,開展消毒劑對ASFV滅活效力評價,以期為我國ASF防控工作提供技術支持。

        1 、材料與方法

        1.1 、消毒劑

        收集市面常見的含碘、季銨鹽、過硫酸氫鉀、二氧化氯等四類消毒劑,其中含碘類7種,商品代號A1~7;季銨鹽類1種,商品代號B1;過硫酸氫鉀類5種,商品代號C1~5;二氧化氯類消毒劑1種,商品代號D1。除A1、C5外,其余產品均注冊有獸藥產品批準文號,試驗時所有產品均在有效期內(表1)。

        1.2、 病毒

        中國非洲豬瘟病毒分離株African swine fever virus isolate CN2018/1株,由國家非洲豬瘟參考實驗室分離鑒定。

        表1 消毒劑產品信息
      表1 消毒劑產品信息

        1.3 、試劑與耗材

        DMEM培養基、胎牛血清為GIBCO公司產品;細胞瓶及96孔細胞板,購自Corning公司。

        1.4 、豬肺泡巨噬細胞、紅細胞和血清制備

        無菌采集健康豬肺臟,向肺臟注入滅菌PBS灌洗數次,收集灌洗液,離心收集豬肺泡巨噬細胞,按5×106個/m L濃度100μL/孔接種96孔板。次日鋪板,進行測試。

        同步無菌采集抗凝血,離心收集血清,之后將細胞沉淀洗滌3~5次,棄去白細胞和血小板,用PBS配成10%豬紅細胞懸液,4℃保存備用。

        1.5 、消毒劑對細胞狀態影響試驗

        基于畜禽欄舍、運載工具、器具消毒及皮膚黏膜(部分含碘類消毒劑適用)消毒目的,按消毒劑說明書推薦,合理選擇高、中、低工作濃度,并將消毒劑原液制成10倍工作濃度備用。將0.1 m L10倍工作濃度液加入到0.9 m L含1%豬血清的PBS中充分混合,混合物分別在20℃和4℃條件下作用30 min。部分無法配制10倍工作濃度的,包括含碘類消毒劑A1、A4、A5的1:2稀釋工作濃度,取0.5 m L消毒劑原液加入0.5 m L含1%豬血清的PBS。陰性對照組,直接取1 m L含1%豬血清的PBS,按相同條件作用處理。

        作用結束后,采用含1%豬血清的PBS連續10倍稀釋各組作用后產物至10-8,每孔50μL接種豬肺泡巨噬細胞培養物,同時加入1%豬紅細胞10μL,每個稀釋度(含未稀釋作用產物即原液)做4重復孔。將96孔板置于37℃5%CO2條件下培養6d,觀察記錄細胞狀態。評估消毒劑對豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞狀態影響,用于消毒劑對ASFV滅活作用試驗參照。

        1.6、 消毒劑對ASFV滅活作用試驗

        參考OIE參考實驗室開展的消毒劑對ASFV滅活效力評估操作流程,制定本試驗方案。按1.5方法,稀釋消毒劑至10倍工作濃度備用。測試組,將0.1 m L 10倍工作濃度液和0.1 m L ASFV培養物加入到0.8 m L含1%豬血清的PBS中充分混合,混合物分別在20℃和4℃條件下作用30 min。部分無法制成10倍工作濃度的,包括含碘類消毒劑A1、A4、A5的1:2稀釋工作濃度,將0.5 m L消毒劑原液和0.1 m L ASFV培養物加入到0.4 m L含1%豬血清的PBS,按相同條件作用處理。陽性對照組,將0.1 m L ASFV培養物加入到0.9 m L含1%豬血清的PBS中充分混合,按相同條件作用處理。陰性對照組,直接取1 m L含1%豬血清的PBS,按相同條件作用處理。

        作用結束后,用含1%豬血清的PBS連續10倍稀釋各組作用后產物至10-8,每孔50μL接種豬肺泡巨噬細胞培養物,同時加入1%豬紅細胞10μL,每個稀釋度(含未稀釋作用產物即原液)做4重復孔。將96孔板置于37℃5%CO2條件下培養6 d,每天觀察,記錄并統計各稀釋度培養孔(含未稀釋作用產物即原液)中紅細胞吸附(HAD)反應結果;如結果可疑或無法判定,則再次傳代后綜合判定結果。重復試驗2次,統計消毒劑不同工作濃度下各培養孔中HAD結果,采用Reed-Muench法計算半數紅細胞吸附量(HAD50),測定病毒滴度log10 HAD50/m L。參照衛生部頒布的2002版《消毒技術規范》[7],計算消毒劑平均滅活對數值,消毒后平均滅活對數值≥4,判為有效滅活ASFV。平均滅活對數值按如下方法計算:設陽性對照組平均病毒感染滴度(HAD50)的為N0,試驗(消毒)組平均病毒感染滴度(HAD50)為Nx。平均滅活對數值=log10 N0-log10 Nx。

        2、 結果與分析

        2.1、 消毒劑對細胞狀態影響試驗

        含碘、季銨鹽、過硫酸氫鉀、二氧化氯等四類消毒劑對細胞狀態影響結果詳見表2。含碘類消毒劑中,A1~5成分主要為碘化物,對細胞狀態影響不顯著。A6、A7主要成分為碘、磷酸、硫酸時,對細胞狀態影響可見于原液、10-1~10-3稀釋孔中,表現為豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞不同程度的破碎、崩解。

        季銨鹽類消毒劑對細胞狀態影響見于原液、10-1~10-2稀釋孔中,表現為豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞不同程度破碎、崩解。

        過硫酸氫鉀類消毒劑對細胞狀態影響可見于原液、10-1稀釋孔中。其中,C4的1:200、1:800、1:1 600工作濃度原液孔中出現不同程度的豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞破碎、崩解;C1、C2、C5的1:200工作濃度原液孔和C4的1:200工作濃度10-1稀釋孔,與陰性對照組相比,豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞輪廓模糊,折光性下降,狀態相對較差,但形態未見明顯異常。

        二氧化氯類消毒劑對細胞狀態影響較小,各培養孔中豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞形態均未見明顯異常。

        2.2 、消毒劑對ASFV滅活作用試驗

        陽性對照組,培養6 d后,發生顯著細胞病變,豬肺泡巨噬細胞大量萎縮、死亡脫落,部分豬肺泡巨噬細胞聚團且附著有大量豬紅細胞,經ReedMuench法計算病毒液滴度為107.2 HAD50/m L。陰性對照組中細胞形態無異常,豬肺泡巨噬細胞輪廓清晰,大多數呈圓形或橢圓形,均勻附著于96孔板底,豬紅細胞均勻散落于豬肺泡巨噬細胞間隙中。

        消毒劑對ASFV滅活檢測結果詳見表3。季銨鹽類和二氧化氯類消毒劑各1種,在本試驗中各工作濃度下原液及不同稀釋度培養孔種,均未發現HAD現象,與陽性對照相比,平均滅活對數為7.2,表明有效滅活ASFV。參照消毒劑說明書主要成分綜合分析,季銨鹽類消毒劑有效成分濃度≥0.015%溴化二甲基-二癸基烴銨(B1的1:667工作濃度),二氧化氯類消毒劑有效成分濃度≥0.007 5%二氧化氯時(D1的1:600工作濃度),可有效滅活ASFV。

        含碘類消毒,主要成分為聚維酮碘時,需在說明書標明濃度范圍的較高工作濃度,即A1的1:2和1:10、A2的1:20、A4的1:2和1:10、A5的1:2工作濃度時,平均滅活對數為7.2,表明有效滅活ASFV。雖然A1、A4、A5主要成分均為10%聚維酮碘,A1、A4有效成分濃度≥1%聚維酮碘(1:10工作濃度)時,可有效滅活ASFV,而A5在相同工作濃度,平均滅活對數僅為1.1~1.5,未能有效滅活ASFV,提示不同廠家同類產品消毒效果存在差異。A6、A7成分為碘、磷酸、硫酸等,與單獨使用碘化物相比,殺滅病毒所需工作濃度更低,A6工作濃度高于0.33%和A7工作濃度高于1:500時,未在培養孔中發現HAD現象,平均滅活對數為7.2,表明有效滅活ASFV。此外,A3所有工作條件下,平均滅活對數均<4,本試驗中未有效滅活ASFV。

        表2 消毒劑對細胞狀態影響試驗結果
      表2 消毒劑對細胞狀態影響試驗結果

        注:“+”.培養孔中出現不同程度的細胞破碎、崩解;“+/-”.培養孔細胞狀態相對較差,但形態未見明顯異常;“—”.培養孔細胞狀態未見明顯異常。

        過硫酸氫鉀類消毒劑需在說明書標明濃度范圍的較高工作濃度時,即1:200稀釋時,平均滅活對數為7.2,表明有效滅活ASFV。不同廠家生產的過硫酸氫鉀類消毒劑在相同工作濃度下,滅活病毒效果有所差異,如在1:800工作濃度下,C1、C4與C5相比,滅活后病毒滴度低約1~2個對數值。此外,C3在所有工作條件下,平均滅活對數均<4,未有效滅活ASFV。

        3 、討論

        理想的消毒劑應具有起效迅速、作用時間持久、受環境因素影響小等特點,并具有廣譜的微生物殺滅能力,對人員無毒無害,在環境中可降解、無殘留。本研究所選的含碘、季銨鹽、過硫酸氫鉀、二氧化氯等四類市面上常用消毒劑,毒性相對較小,對人員和環境相對安全,除用于畜禽欄舍、運載工具、器具等消毒目的外,生產實踐中還常用于人員、辦公場地、宿舍、公共食堂等消毒。

        本研究表明,本試驗所用消毒劑對ASFV均有滅活作用,但滅活效果因消毒劑的種類和工作濃度不同有所差異。相同工作濃度的同一消毒劑產品,在4℃和20℃這兩種條件下的滅活效果基本一致。本試驗中季銨鹽類和二氧化氯類消毒劑,在說明書推薦的工作濃度下,均有效滅活ASFV;多數含碘類、過硫酸氫鉀類消毒劑,需在說明書標明濃度范圍的較高工作濃度時,才可有效殺滅ASFV。少數產品,各有1個廠家生產的含碘類、過硫酸氫鉀類消毒劑,在說明書標明的高、中、低工作濃度均未能有效殺滅ASFV。此外,從含碘類消毒劑A1、A4、A5的1:10工作濃度,過硫酸氫鉀類消毒劑C1、C4、C5的1:800工作濃度顯示的效果差異,可見不同廠家生產的同類消毒劑產品其消毒效果存在差異。

        消毒劑對細胞狀態影響結果顯示,與戊二醛類、酚類消毒劑相比,本研究中的二氧化氯類消毒劑、主要成分為碘化物的含碘類消毒劑、絕大多數過硫酸氫鉀類消毒劑,在測試工作條件下,對細胞損傷相對較小。僅主要成分為碘、磷酸、硫酸等的含碘類消毒劑,及季銨鹽類消毒劑的部分工作濃度下出現不同程度的豬肺泡巨噬細胞和豬紅細胞破碎、崩解。

        表3 消毒劑對非洲豬瘟滅活檢測結果
      表3 消毒劑對非洲豬瘟滅活檢測結果

        注:“—”.在原液及系列稀釋的細胞培養孔中均未出現HAD現象。

        在本研究測試條件下,這四類常用消毒劑均可有效滅活ASFV。但在實際應用中需結合生產實際,包括根據消毒對象性質、環境條件、表面有機物等選用合適的消毒劑種類,同時保證合理的使用濃度、作用溫度和作用時間,執行嚴格的消毒程序,只有這樣才能獲得良好的消毒效果[2,8]。本研究從細胞水平上,驗證評估了四類常用消毒劑對ASFV的滅活效果,可為生豬養殖、運輸調運、屠宰加工、檢驗檢疫等工作中的消毒劑的選擇和使用提供參考。

        參考文獻

        [1] BELTRAN-ALCRUDO D,ARIS M,GALLARDO C,et al.非洲豬瘟:發現與診斷-獸醫指導手冊[M].羅馬:聯合國糧食與農業組織(FAO),2018.
        [2]JUSZKIEWICZ M,WALCZAK M,WOZNIAKOWSKI G,et al.Characteristics of selected active substances used in disinfectants and their virucidal activity against ASFV[J].Journal of veterinary research,2019,63(1):17-25.
        [3]GALLINA L,SCAGLIARINI A.Virucidal efficacy of common disinfectants against orf virus[J].Veterinary record,2010,166(23):725-726.
        [4]SHIRAI J,KANNO T,TSUCHIYA Y,et al.Effects of chlorine,iodine,and quaternary ammonium compound disinfectants on several exotic disease viruses[J].Journal of veterinary medical science,2000,62(1):85-92.
        [5]KRUG P W,DAVIS T,O'BRIEN,C,et al.Disinfection of transboundary animal disease viruses on surfaces used in pork packing plants[J].Veterinary microbiology,2018,219:219-225.
        [6]TURNER C,WILLIAMS S M.Laboratory-scale inactivation of African swine fever virus and swine vesicular disease virus in pig slurry[J].Journal of applied microbiology,1999,87(1):148-157.
        [7] 衛生部衛生法制與監督司.消毒技術規范[S].北京:中華人民共和國衛生部,2002.
        [8]李尚華,逄磊.非洲豬瘟下之豬場消毒劑選擇的建議[J].今日養豬業,2019,110(2):68-69.

        原文出處:南文龍,鞏明霞,鄒艷麗,劉珊,陸游,吳曉東,陳義平.四類常用消毒劑對非洲豬瘟病毒滅活效果的評價[J].中國動物檢疫,2020,37(12):135-140.
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